Sätter dit en prime av intresse, restriktionssite. En insert som med hjälp av restriktionsenzym kan kapa och får en sticky ends.
self-ligated vector, plasmiden binder till sig själv, isolera med blue/white.
ampicillin? x-gal? iptg? lacz-alpha restriction, sitter ett repressionprotein, iptg inaktiverar en repressor AmpR: ampicillin restistans pellet? supernatant: det som hamnar ovanpå nukleasfritt vatten kilator? ko-faktor för vatten RnasaA: bryter ner RNA SDS löser upp fosfolipider och proteiner i cellmembranet eulera SYBR safe
Dagens labb
Rena fram plasmiden
Klippar ur genen av intresse
Kör agarose gel
Tolka resultatet
What are the sites the plasmid contains that allow for this experiment?
- Lacz
- Β-lactamas (ampicilin resistansen)
- BamH-insertion site, i vårta multiple cloning site
- Origin of replication för att kunna replikera
What are the 3 compounds in the LB plates that allow for selection of bacteria with plasmid and the distinction of plasmids with and without the inserted gene?
- IPTG
- X-Gal
- Ampicillin
What are the six steps in plasmid preparation and purification?
- Pelleteringen
- Suspendera, lösa upp pelleten
- Lysering - så det läcker ut plasmid
- Neutralisera - skyddar plasmiden på nytt
- Skölja bort salter
- Tillsätta vatten för att eulera ut vår plasmid
What is a restriction enzyme and why was it used in this experiment?
Hjälpa till att klippa ut genen och foga in vår plasmid, sticky ends
Explain the principle of Gel Electrophoresis, what is it for?
Separation av storlek eller massa på våra DNA-fragment. Elektrostatiskt repulsion, som får våra joner att separeras
What´s the compound that allows for the visualization of the DNA in the gel?
SYBR safe
How many times does BamHI cut the plasmid without the insert? And the plasmid with the insert?
Hur många gånger kommer BamHI klippa vår plasmed
- utan insert: 1
- med insert: 2 på var sin sida om inserten för att få ut den
Explain the different plasmid conformations that exist.
- relaxed
- supercoiled supper snabbt, de är tvinnade
- linjära