Uppgift
Du ska rena ett protein med gelfiltrering. Proteinet innehåller också en his-tagg. (4p) Max 200 ord.
A) Beskriv egenskaper hos proteinet och kolonnen som möjliggör rening med gelfiltrering.
B) Beskriv vad en his-tag är och hur den kan användas för rening och detektion.
Svar
A) Gelfiltrening består av en fast fas med porösa kulor i en kolonn, och en mobil fas med en buffert och proteinet som ska renas. Små molekyler kommer att fastna i håligheterna i kulorna, medan stora proteiner kommer att komma ut först. Reningsmetoden är alltså baserad på proteiners storlek.
B) His-tagg är en sekvens av 6 histidin-aminosyror efter varandra. His-tagg binder starkt till nickel-joner och man kan därför använda den egenskapen vid rening av proteinet. Man använder då affinitetskromatografi, och renar proteinet baserat på selektivitet alltså en specifik egenskap. Proteinet kan sedan elueras med Imidazol, som konkurrerar ut His-taggen.
Totalpoäng: 4