Uppgift
Du jobbar på ett labb över sommaren och har fått i uppgift att göra en rening av ett protein med hjälp av affinitetskromatografi.
A) Beskriv egenskaper hos proteinet och kolonnen som möjliggör rening med hjälp av affinitetskromatografi.
B) Ange en metod för att analysera storleken på ditt framrenade protein och ge en kortfattad förklaring till hur denna fungerar.
(4p) (Max 200 ord.)
Svar
A) Affinitetskromatografi är rening baserad på egenskaper hos proteinet. Ett exempel är att man kan sätta på 6 stycken histidin på proteinet på DNA nivå, sk 6xHis. Histidin har en hög affinitet för nickeljoner som man kan lägga i kolonnen. När man häller ner proteinblandningen kommer histidin att binda till nickeljonerna vilket gör att proteinet stannar i kolonnen. För att sedan få proteinet att släppa kan man använda sig av imidazol som har ännu högre affinitet för nickeljonerna för att eleduera ut proteinet.
B) Man kan använda sig av SDS-Page. Då utsätter man proteinet för SDS molekyler som kommer att binda in till det. SDS molekylerna är negativt laddade och ju större protein, ju fler SDS molekyler kommer binda in, ju mer negativt laddat blir det. Sedan använder man sig av gelelektrofores (Page) för att få proteinet att röra på sig i ett elektromagnetiskt fält. Större protein kommer röra sig långsammare medan snabbare rör sig fortare. DVS Störst, sist.
Totalpoäng: 4