Du jobbar på labb över sommaren och har fått i uppgift att göra en rening av ett protein baserat på laddning. (4p) (Max 200 ord)
A) Beskriv vilken metod du skulle använda dig av och hur denna fungerar.
B) Ange en metod för att analysera storleken på ditt framrenade protein och ge en förklaring till hur denna fungerar.
Svar
a) Jonbyteskromotografi. Efter att ha lösgjört proteinerna i homogenisat går reningsmetoden ut på att man för proteinlösningen genom en kolonn som innehåller kulor som antingen är positivt eller negativt laddade beroende på proteinets laddning som man vill ha ut. En katjonsbytare är negativt laddade kulor i kolonnen som kommer att attrahera positivt laddade proteiner från fasen man för igenom medan en anjonbytare däremot är positivt laddade kulor som kommer att attrahera negativt laddade proteiner. Det är proteinets totala laddning som selekteras. Sedan kan en buffert eller salt användas för att eluera proteinerna från de laddade kulorna i kolonnen för vidare analys. b) För att analysera storleken hade jag valt SDS page som är en elektrofores-metod där man först blandar i ämnet SDS (sodum dodecyl sulfate) som är negativt laddade molekyler som kommer att binda till aminosyrorna och slå ut proteinets tidigare laddning. Proteinetet kommer att binda SDS baserat på hur stort det är, ju större protein desto mer negativt laddat då fler aminosyror laddas av SDS och proteinerna får vandra i ett elektriskt fält där de minsta vandrar längst mot positiv pol då de hindras minst av de steriska hindrena i polyakrylamid-gelen. Separation map STORLEK