Du jobbar på labb över sommaren och har fått i uppgift att göra en rening av ett protein baserat på laddning. (4p) (Max 200 ord)
A) Beskriv vilken metod du skulle använda dig av och hur denna fungerar.
B) Ange en metod för att analysera storleken på ditt framrenade protein och ge en förklaring till hur denna fungerar.
Svar
A) Jonbyteskromatografi kan användas. Det är en metod där man kan rena ett protein baserat på dess laddning.
I denna metod finns det två olika typer av kolonner som kan användas: katjonbytare och anjonbytare.
Katjonbytare binder till katjoner (positivt laddade) och låter negativt laddade proteiner passera.
Anjonbytare binder till anjoner (negativt laddade) och tillåter passering av positivt laddade proteiner.
Sedan kan proteinet elueras med pH och/eller salt.
B) Storleken kan analyseras med metoden gelelektrofores.
Gelelektrofores går ut på att protein får migrera i en gel som befinner sig i ett elektriskt fält, där proteiner får gå från en negativ elektrod till en positiv.
De minsta proteinerna kommer att vandra snabbast och längst i gelen för att de har minst volym.
Man kan använda t.ex. ett fluorescerande ämne som gör att banden som bildas kan visualiseras under UV-strålning.
Sedan kan en storleksmarkör användas för att bestämma vilken storlek som de protein som man har undersökt har.