Du jobbar på labb över sommaren och har fått i uppgift att köra affinitetskromatografi med en 6xHis-tag.
A) Beskriv kortfattat principen för affinitetskromatografi.
B) Hur kan man eluera proteinet?
C) Ange en metod som kan användas för analys av det eluerade proteinet.
Max 200 ord.
Svar
A) Affinitetskromatografi är en kromatografimetod som bygger på att separera proteiner baserat på en viss egeskap. Exempelvis kan glykosylerade proteiner separeras ut genom att kulorna i kolonnen har molekyler som binder till sockerenheterna. Man kan även, som i detta fall, modifiera DNA-sekvensen för proteinet man är ute efter genom att lägga till en tag av histidin vilken binder väl till nickeljoner på kulorna.
B) För att få proteinet att lossna från kulorna krävs att man eluerar. Det kan ske med hjälp av en stark buffert eller saltlösning, ofta en kombination av båda.
C) Gelelektrofores, SDS-PAGE, kan användas för att analysera proteinets storlek samt hur väl proteinreningen lyckats.