Vad är definitionen av ”genom”?
Allt genetiskt material (DNA) i en organism eller cell.
1. Vad menas med ”proteom”?
Samtliga proteiner som uttrycks i en cell, vävnad eller organism vid ett givet tillfälle.
2. Vad menas med ett homogenisat?
En cell- eller vävnadssuspension där celler har brutits sönder.
3. Egenskaper hos proteiner som kan användas för rening
Storlek, laddning, hydrofobicitet och specifik bindningsförmåga.
4. I vilken ordning elueras proteiner vid gelfiltrering?
Stora proteiner först, små sist.
5. Vilken laddning har proteiner som binder en katjonbytare?
Positiv laddning.
6. Vilken laddning har proteiner som inte binder till katjonbytare?
Negativ eller neutral laddning.
7. Vilken laddning har proteiner som binder en anjonbytare?
Negativ laddning.
8. Vilken laddning har proteiner som inte binder till anjonbytare?
Positiv eller neutral laddning.
9. Hur eluerar man protein från en katjonbytare?
Genom ökad salthalt eller ändrat pH.
10. Vad menas med affinitetskromatografi?
Rening baserad på specifik bindning mellan protein och ligand.
11. Hur elueras 6xHis-protein från Ni²⁺-kolonn?
Med imidazol.
12. Vad kallas det automatiserade systemet för proteinrening?
ÄKTA-system.
13. Vilken parameter följs oftast?
Absorbans vid 280 nm.
14. Vilken gel används i SDS-PAGE?
Polyakrylamidgel.
15. Vad är SDS?
Ett anjoniskt detergent (natriumdodecylsulfat).
16. Vilken laddning har SDS?
Negativ.
17. Vad hamnar högst upp respektive längst ner i SDS-PAGE?
Stora proteiner överst, små längst ner.
18. Hur visualiseras SDS-PAGE?
Coomassie-färgning eller silverfärgning.
19. Vad menas med proteinreferens?
Molekylviktsmarkör (protein ladder).
20. Vad är isoelektrisk fokusering?
Separation av proteiner efter deras isoelektriska punkt (pI).
21. Vad är tvådimensionell gelelektrofores?
Kombination av isoelektrisk fokusering och SDS-PAGE.
22. Hur används SDS-PAGE för att följa proteinrening?
Genom att analysera renhet och bandintensitet över reningssteg.
23. Vad är en antikropp?
Ett protein som specifikt binder ett antigen.
24. Vad är ett antigen?
En molekyl som känns igen av antikroppar.
25. Vad är en epitop?
Den del av antigenet som antikroppen binder.
26. Vad kännetecknar en monoklonal antikropp?
Binder en enda specifik epitop.
27. Vad kännetecknar polyklonala antikroppar?
Binder flera epitoper på samma antigen.
28. Hur tillverkas monoklonala antikroppar?
Via hybridomteknik (B-cell + myelomcell).
29. Beskriv ELISA
En enzymbaserad metod för att detektera antigen eller antikroppar.
30. Beskriv indirekt ELISA
Antigen på platta → primärantikropp → enzymkopplad sekundärantikropp.
31. Beskriv Sandwich ELISA
Antigen fångas mellan två antikroppar.
32. Vilken ELISA-metod är mest specifik?
Sandwich ELISA.
33. Kliniska applikationer för ELISA
Indirekt: antikroppsdetektion (infektioner).
Sandwich: antigen-/hormondetektion.
34. Vad är Western blot?
Proteiner separeras med SDS-PAGE, överförs till membran och detekteras med antikroppar.
35. Skillnad mellan SDS-PAGE och Western blot?
SDS-PAGE separerar proteiner; Western blot identifierar specifika proteiner.
36. Vad kan masspektrometri detektera?
Proteiner, peptider, metaboliter och lipider.
37. Användningsområden för masspektrometri
Proteomik, identifiering av proteiner, posttranslationella modifieringar.
38. Varför behövs kristaller för röntgenkristallografi?
För att ge regelbundet diffraktionsmönster.
39. Varför är hög upplösning viktig?
För att kunna se atomära detaljer i strukturen.
40. Vanligaste atomen i NMR?
¹H (väte).
41. Fördel med kryo-EM jämfört med röntgenkristallografi?
Kräver inga kristaller och kan studera stora komplex i nära nativt tillstånd.